मंकीपॉक्स वायरस रियल टाइम पीसीआर किट
उत्पाद विवरण
उपयोग का उद्देश्य
इसका उपयोग वास्तविक समय पीसीआर सिस्टम का उपयोग करके मानव सीरम या घाव एक्सयूडेट नमूनों में मंकीपॉक्स वायरस का पता लगाने के लिए किया जाता है।
परीक्षण सिद्धांत
यह उत्पाद एक फ्लोरोसेंट जांच-आधारित टैकमैन® वास्तविक समय पीसीआर परख प्रणाली है।मंकीपॉक्स वायरस के F3L जीन का पता लगाने के लिए विशिष्ट प्राइमर और जांच डिज़ाइन की गई हैं।मानव संरक्षित जीन को लक्षित करने वाला आंतरिक नियंत्रण गलत-नकारात्मक परिणामों से बचने के लिए नमूना संग्रह, नमूना हैंडलिंग और वास्तविक समय पीसीआर प्रक्रिया की निगरानी करता है।किट पूरी तरह से प्रीमिक्स लियोफिलाइज्ड सिस्टम है, जिसमें मंकीपॉक्स वायरस का पता लगाने के लिए आवश्यक सामग्रियां शामिल हैं: न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन एंजाइम, यूडीजी एंजाइम, रिएक्शन बफर, विशिष्ट प्राइमर और जांच।
मुख्य सामग्री
प्रदान किए गए घटक तालिका में सूचीबद्ध हैं।
| अवयव | पैकेट | घटक |
| मंकीपॉक्स वायरसलियोफ़िलाइज़्ड प्रीमिक्स | 8 स्ट्रिप पीसीआर ट्यूब× 6 पाउच | प्राइमर, जांच, dNTP/dUTP मिक्स, Mg2+, Taq DNA पोलीमरेज़, UDG एंजाइम |
| एमपीवी सकारात्मक नियंत्रण | 400 μL×1 ट्यूब | लक्ष्य जीन युक्त डीएनए अनुक्रम |
| एमपीवी नकारात्मक नियंत्रण | 400 μL×1 ट्यूब | मानव जीन खंड युक्त डीएनए अनुक्रम |
| घोलने वाला घोल | 1 एमएल×1 ट्यूब | स्टेबलाइजर |
| अनुरूप प्रमाण पत्र | 1 टुकड़ा | / |
ऑपरेशन प्रवाह
1. नमूनासंग्रह:नमूने को तदनुसार बाँझ ट्यूबों में एकत्र किया जाना चाहिए
मानक तकनीकी विशिष्टताओं के साथ।
2. अभिकर्मक तैयारी (अभिकर्मक तैयारी क्षेत्र)
किट के घटकों को बाहर निकालें, अतिरिक्त उपयोग के लिए उन्हें कमरे के तापमान पर संतुलित करें।
3. नमूना प्रसंस्करण (नमूना प्रसंस्करण क्षेत्र)
3.1 न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण
वायरल डीएनए निष्कर्षण किट की संबंधित आवश्यकताओं और प्रक्रियाओं के अनुसार, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के लिए 200μL तरल नमूने, सकारात्मक नियंत्रण और नकारात्मक नियंत्रण लेने की सिफारिश की जाती है।
3.2 लियोफिलिज्ड पाउडर को घोलना और टेम्पलेट जोड़ना
नमूनों की संख्या के अनुसार मंकीपॉक्स वायरस लियोफिलाइज्ड प्रीमिक्स तैयार करें।एक नमूने के लिए एक पीसीआर ट्यूब की आवश्यकता होती है जिसमें लियोफिलाइज्ड प्रीमिक्स पाउडर होता है।नकारात्मक नियंत्रण और सकारात्मक नियंत्रण को दो नमूनों के रूप में माना जाना चाहिए।
(1) लियोफिलाइज्ड प्रीमिक्स युक्त प्रत्येक पीसीआर ट्यूब में 15μL घुलनशील घोल डालें, फिर प्रत्येक पीसीआर ट्यूब में क्रमशः 5μL निकाले गए नमूने/नकारात्मक नियंत्रण/सकारात्मक नियंत्रण डालें।
(2) पीसीआर ट्यूबों को कसकर कवर करें, पीसीआर ट्यूबों को हाथ से तब तक झटका दें जब तक कि लियोफिलाइज्ड पाउडर पूरी तरह से घुल न जाए और मिश्रित न हो जाए, तात्कालिक कम गति वाले सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा तरल को पीसीआर ट्यूबों के नीचे इकट्ठा करें।
(3) यदि पता लगाने के लिए सामान्य वास्तविक समय पीसीआर उपकरण का उपयोग करें, तो सीधे पीसीआर ट्यूबों को प्रवर्धन क्षेत्र में स्थानांतरित करें;यदि पता लगाने के लिए BTK-8 का उपयोग करें, तो निम्नलिखित ऑपरेशन करने की आवश्यकता है: पीसीआर ट्यूब से 10 μL तरल को BTK-8 के प्रतिक्रिया चिप कुएं में स्थानांतरित करें।एक पीसीआर ट्यूब चिप पर एक कुएं से मेल खाती है।पिपेटिंग ऑपरेशन के दौरान, सुनिश्चित करें कि पिपेट 90 डिग्री लंबवत है।एयरोसोल बैरियर पिपेट युक्तियों को मध्यम बल के साथ कुएं के केंद्र में रखा जाना चाहिए और जब पिपेट पहले गियर तक पहुंच जाए (बुलबुले से बचने के लिए) तो उसे धक्का देना बंद कर देना चाहिए।कुएँ भर जाने के बाद, सभी कुओं को ढकने के लिए एक प्रतिक्रिया चिप झिल्ली निकालें और फिर चिप को प्रवर्धन पहचान क्षेत्र में स्थानांतरित कर दिया जाता है।
4. पीसीआर प्रवर्धन (पहचान क्षेत्र)
4.1 पीसीआर ट्यूब/रिएक्शन चिप को प्रतिक्रिया टैंक में रखें और प्रत्येक प्रतिक्रिया के नाम उचित क्रम में सेट करें।
4.2 प्रतिदीप्ति का पता लगाने की सेटिंग्स: (1) मंकीपॉक्स वायरस (एफएएम);(2) आंतरिक नियंत्रण (CY5)।
4.3 निम्नलिखित साइक्लिंग प्रोटोकॉल चलाएँ
ABI7500, बायो-रेड CFX96, SLAN-96S, क्वांटस्टूडियो का प्रोटोकॉल:
| कदम | तापमान | समय | साइकिल | |
| 1 | पूर्व विकृतीकरण | 95℃ | 2 मिनट | 1 |
| 2 | विकृतीकरण | 95℃ | 10 एस | 45 |
| एनीलिंग, विस्तार, प्रतिदीप्ति अधिग्रहण | 60℃ | 30 एस | ||
BTK-8 का प्रोटोकॉल:
| कदम | तापमान | समय | साइकिल | |
| 1 | पूर्व विकृतीकरण | 95℃ | 2 मिनट | 1 |
| 2 | विकृतीकरण | 95℃ | 5 एस | 45 |
| एनीलिंग, विस्तार, प्रतिदीप्ति अधिग्रहण | 60℃ | 14 एस | ||
5. परिणाम विश्लेषण (कृपया उपकरण उपयोगकर्ता मैनुअल देखें)
प्रतिक्रिया के बाद, परिणाम स्वचालित रूप से सहेजे जाएंगे।विश्लेषण करने के लिए "विश्लेषण करें" पर क्लिक करें, और उपकरण परिणाम कॉलम में प्रत्येक नमूने के सीटी मानों की स्वचालित रूप से व्याख्या करेगा।नकारात्मक और सकारात्मक नियंत्रण परिणाम निम्नलिखित "6. गुणवत्ता नियंत्रण" के अनुरूप होंगे।
6. गुणवत्ता नियंत्रण
6.1 नकारात्मक नियंत्रण: एफएएम चैनल में कोई सीटी या सीटी>40 नहीं, सामान्य प्रवर्धन वक्र के साथ सीवाई5 चैनल में सीटी≤40।
6.2 सकारात्मक नियंत्रण: सामान्य प्रवर्धन वक्र के साथ एफएएम चैनल में सीटी≤35, सामान्य प्रवर्धन वक्र के साथ सीवाई5 चैनल में सीटी≤40।
6.3 यदि उपरोक्त सभी मानदंड पूरे होते हैं तो परिणाम मान्य है।अन्यथा, परिणाम अमान्य है.
परिणाम व्याख्या
निम्नलिखित परिणाम संभव हैं:
| एफएएम चैनल का सीटी मान | CY5 चैनल का सीटी मान | व्याख्या | |
| 1# | कोई सीटी या सीटी>40 नहीं | ≤40 | मंकीपॉक्स वायरस नकारात्मक |
| 2# | ≤40 | कोई परिणाम | मंकीपॉक्स वायरस पॉजिटिव |
| 3# | 40～45 | ≤40 | पुनः परीक्षण;यदि यह अभी भी 40~45 है, तो 1# के रूप में रिपोर्ट करें |
| 4# | कोई सीटी या सीटी>40 नहीं | कोई सीटी या सीटी>40 नहीं | अमान्य |
टिप्पणी: यदि अमान्य परिणाम आता है, तो नमूना एकत्र करने और फिर से परीक्षण करने की आवश्यकता है।
आदेश की जानकारी
| प्रोडक्ट का नाम | बिल्ली।नहीं | आकार | नमूना | शेल्फ जीवन | ट्रांस.एवं स्टो.अस्थायी. |
| मंकीपॉक्स वायरस रियल टाइम पीसीआर किट | B001P-01 | 48 परीक्षण/किट | सीरम / लेसियन एक्सयूडेट | 12 महीने | -25～-15℃ |
